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      標題摘要內容
       circRNA服務

      circRNA服務?
      circRNA體外制備
      來源: | 作者:geneseed | 發布時間: 2017-09-02 | 26595 次瀏覽 | 分享到:

      環狀RNA在生物界內廣泛存在,由于它具有獨特的生物學結構,其在生物功能調控和疾病治療方面具有重要的作用,新型冠狀病毒肺炎疫情也使得核酸疫苗取得了巨大的關注。環狀RNA的體外大規模精準制備是環狀RNA未來科研、臨床及產業化發展進步的重要前提。

       

      吉賽生物擁有國內領先的核心專利技術——一種制備環狀RNA的方法(國家授權發明專利:202010094558.6),借助線性RNA的二級結構,以設計好的線性RNA為原料,通過酶促反應實現RNA自我環化,無需借助夾板鏈或輔助鏈,顯著抑制成環過程大分子副產物的產生,實現目的環狀RNA規?;透咝е苽?。經過純化回收后能夠得到高濃度高純度的環狀RNA,可以直接用于細胞轉染或動物注射等后續實驗研究。

       

      服務全方位:

      科研級別:

      1. 目標序列從設計合成到環化驗證的全流程一站式服務

      2. 線性RNA產物的環化與質檢服務

      工業級別:

      大規模用于研發的環狀RNA體外制備

       

      技術優勢:

      制備高效:采用獨特的設計方法與領先的專利技術,無需借助夾板鏈或輔助鏈,環化效率通??蛇_80%以上。

      環化片段長:可提供20~3000 nt的環狀RNA體外制備,若制備需求大于3000 nt,請詳詢。

      質控嚴謹:采用嚴謹的質控方法,多維度對環化產物進行質控。

      技術先進:擁有先進的實驗設備和資深的技術團隊,快速響應并交付客戶需求。

      服務全面:提供序列到成品的一站式服務,也提供線性RNA的環化服務,還提供工業級別的大規模制備。

      個性化強:客戶可定制RNA環化服務。

       

      不同環化策略的對比:

      T4 DNA/RNA連接酶

      內含子自剪切

      吉賽生物核心專利技術

       

      無外源序列殘留

      環化效率較低

      純化工藝放大難

      有病毒序列殘留

      環化效率較高

      純化工藝放大容易

      無外源序列殘留

      環化效率較高

      純化工藝放大容易

       

      服務流程:

       

       

      服務內容:

      客戶提供:客戶信息、RNA序列、制備規格以及其他要求等

      我們交付:約定規格的環狀RNA與環狀RNA的質控結果

       

      交付周期:

      以交付100 μg環狀RNA為例,周期為30~35個工作日,若交付的環狀RNA量更多,周期需要適當延長。

       

      嚴格質控,確保品質

      1、RNase R耐受測試

      圖1顯示,體外制備的環狀RNA完全耐受RNase R*的切割(RNase R 37℃反應15 min)。

       

      圖1 環化RNA1.5%瓊脂糖電泳檢測

      * 吉賽生物自主研發的國內首款RNase R,引用文獻超100篇,已服務200多家實驗室。點擊詳情:RNase R

       

      2、環狀RNA環化接口測序鑒定

      對于純化獲得的環狀RNA,進一步通過逆轉錄成cDNA,設計PCR引物測序來檢測環化接口是否正確,圖2顯示:體外制備的環狀RNA在指定的環化區域發生了環化。

       

      圖2 環化RNA Sanger PCR測序檢測環化接口

      3、環狀RNA完整度檢測

      通過Agilent 2100質檢,圖3顯示:體外制備的環狀RNA完整度高,沒有發生降解,片段大小符合預期,無其他雜帶。

       

      圖3 Agilent 2100質檢環狀RNA結果

       

      相關服務:

      吉賽生物也提供circRNA過表達載體構建服務(國家授權發明專利:201510566302),優化升級的第五代circRNA過表達載體現有pCD5-ciR、pCD25-ciR、pLO5-ciR、pLC5-ciR、pK5ssAAV-ciR和pK25ssAAV-ciR,能滿足普通真核表達、慢病毒包裝和腺相關病毒(AAV)包裝等多種用途。載體均攜帶優化過的側翼成環框架,含有精心改造的Alu元件、QKI等RBP的結合位點,并使用全新設計的環化介導序列。

       


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