環狀RNA在生物界內廣泛存在，由于它具有獨特的生物學結構，其在生物功能調控和疾病治療方面具有重要的作用，新型冠狀病毒肺炎疫情也使得核酸疫苗取得了巨大的關注。環狀RNA的體外大規模精準制備是環狀RNA未來科研、臨床及產業化發展進步的重要前提。

吉賽生物擁有國內領先的核心專利技術——一種制備環狀RNA的方法（國家授權發明專利：202010094558.6），借助線性RNA的二級結構，以設計好的線性RNA為原料，通過酶促反應實現RNA自我環化，無需借助夾板鏈或輔助鏈，顯著抑制成環過程大分子副產物的產生，實現目的環狀RNA規?；透咝е苽?。經過純化回收后能夠得到高濃度高純度的環狀RNA，可以直接用于細胞轉染或動物注射等后續實驗研究。

服務全方位：

科研級別：

1. 目標序列從設計合成到環化驗證的全流程一站式服務

2. 線性RNA產物的環化與質檢服務

工業級別：

大規模用于研發的環狀RNA體外制備

技術優勢：

制備高效：采用獨特的設計方法與領先的專利技術，無需借助夾板鏈或輔助鏈，環化效率通?？蛇_80%以上。

環化片段長：可提供20~3000 nt的環狀RNA體外制備，若制備需求大于3000 nt，請詳詢。

質控嚴謹：采用嚴謹的質控方法，多維度對環化產物進行質控。

技術先進：擁有先進的實驗設備和資深的技術團隊，快速響應并交付客戶需求。

服務全面：提供序列到成品的一站式服務，也提供線性RNA的環化服務，還提供工業級別的大規模制備。

個性化強：客戶可定制RNA環化服務。

不同環化策略的對比：

服務流程：

服務內容：

客戶提供：客戶信息、RNA序列、制備規格以及其他要求等

我們交付：約定規格的環狀RNA與環狀RNA的質控結果

交付周期：

以交付100 μg環狀RNA為例，周期為30~35個工作日，若交付的環狀RNA量更多，周期需要適當延長。

嚴格質控，確保品質

1、RNase R耐受測試

圖1顯示，體外制備的環狀RNA完全耐受RNase R*的切割（RNase R 37℃反應15 min）。

圖1 環化RNA1.5%瓊脂糖電泳檢測

* 吉賽生物自主研發的國內首款RNase R，引用文獻超100篇，已服務200多家實驗室。點擊詳情：RNase R

2、環狀RNA環化接口測序鑒定

對于純化獲得的環狀RNA，進一步通過逆轉錄成cDNA，設計PCR引物測序來檢測環化接口是否正確，圖2顯示：體外制備的環狀RNA在指定的環化區域發生了環化。

圖2 環化RNA Sanger PCR測序檢測環化接口

3、環狀RNA完整度檢測

通過Agilent 2100質檢，圖3顯示：體外制備的環狀RNA完整度高，沒有發生降解，片段大小符合預期，無其他雜帶。

圖3 Agilent 2100質檢環狀RNA結果

相關服務：

吉賽生物也提供circRNA過表達載體構建服務（國家授權發明專利：201510566302），優化升級的第五代circRNA過表達載體現有pCD5-ciR、pCD25-ciR、pLO5-ciR、pLC5-ciR、pK5ssAAV-ciR和pK25ssAAV-ciR，能滿足普通真核表達、慢病毒包裝和腺相關病毒（AAV）包裝等多種用途。載體均攜帶優化過的側翼成環框架，含有精心改造的Alu元件、QKI等RBP的結合位點，并使用全新設計的環化介導序列。